细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用方法
2025-06-20 
MCE
MCE 细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒可用于细胞或组织的衰老情况。
描述及优势
由于复制能力有限，正常细胞会进入细胞周期停滞期，也称为细胞衰老期。在衰老阶段，细胞仍处于代谢活跃期，不会发生细胞死亡或分裂。这些衰老细胞会呈现出一种特殊的表型状态，包括出现多核细胞、空泡化增加、表达依赖 pH 值的 β-半乳糖苷酶，以及细胞增大和延长的形态变化。衰老可通过多种机制在肿瘤抑制、肿瘤进展、衰老和组织修复中发挥作用。
β-半乳糖苷酶（又称 β-gal）是一种重要的水解酶，可催化含半乳糖的碳水化合物水解为单糖。β-半乳糖苷的底物包括乳糖、各种糖蛋白、神经节苷脂 GM1 和乳糖基甘油三酯。β-半乳糖苷酶在分子生物学中应用广泛，例如，在分子克隆过程中分离重组细菌时，利用细菌β-半乳糖苷酶基因 (lacZ) 在 β-gal 底物存在下的 α 补体来鉴定重组克隆。在细胞生物学中，衰老相关 β-半乳糖苷酶 （SA-β-gal，定义为 pH 值为 6.0 时的 β-gal 活性）是一种广泛使用的复制衰老标记。
MCE 细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒基于 SA-β-gal 在 pH 为 6.0 时催化 X Gal （5-溴-4-氯-3-吲哚- β-D-吡喃半乳糖苷，5-bromo-4 chloro-3-indolyl-β D galactopyranoside, X-gal）生成蓝色产物，实现在光学显微镜下观察细胞或组织的衰老情况。
使用方法
贴壁细胞染色（6孔板）
1 建议细胞密度到 60-80% 时进行实验
2 去除细胞培养液，用 PBS 清洗 1 次
3 加入 1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 10-15 min
4 去除 β-半乳糖苷酶染色固定液，用 PBS 清洗 3 次， 每次 2-3 min
5 根据表 1 配制染色工作，具体染色工作液总量可根据样本类型、样本数等进行调整。
6 去除 PBS ，每孔加入 1 mL 染色工作液，37°C 无 CO2 培养箱孵育过夜。
注：为防止液体蒸发影响染色结果，建议在边缘孔中加入水或 PBS ，减少“边缘效应”，同时用封口膜或保鲜膜封住孔板
7 普通光学显微镜下进行观察计数
8（可选步骤）去除染色工作液，加入 2 mL PBS，4°C 可保存数天。
悬浮细胞染色
1 收集细胞， 2500 g 离心 10 min，用 PBS 清洗 1 次
2 加入 1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 10-15 min。
注：可将细胞放置摇床上缓慢摇动，以避免细胞结团
3 2500 g 离心 10 min，去除 β-半乳糖苷酶染色固定液，用 PBS 清洗 3 次，每次 1-3 min
4 根据表 1 配制染色工作液，具体染色工作液总量可根据样本类型、样本数等进行调整
5 2500 g 离心 10 min 去除 PBS。每管加入 0.5-1 mL 染色工作液，37°C 孵育过夜
6 吸取部分细胞滴加到载玻片上或 6 孔板内，普通光学显微镜下进行观察计数
7 （可选步骤）去除染色工作液，加入 1 mL PBS，4°C 可保存数天。
