使用方法：一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
2025-06-19 
MCE
MCE 一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒采用一步染色的方法快速检测细胞凋亡。染色后，正常细胞基本无荧光，凋亡细胞呈绿色荧光。
描述及优势：
MCE 一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒采用一步染色的方法快速检测细胞凋亡。细胞凋亡时,相关 DNA 内切酶被激活,进而切断核小体间的基因组 DNA,产生 180-200 bp 的 DNA ladder,其暴露的 3'-OH 经末端脱氧核苷酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT) 催化后可加上绿色荧光探针 FITC 标记的 dUTP,借助荧光显微镜或流式细胞仪即可检测细胞凋亡的发生。FITC 最大激发波长为 488 nm,最大发射波长为 525 nm,凋亡细胞显示绿色荧光,正常细胞无荧光。
使用方法
样品准备
1.1 贴壁细胞:
a.洗涤:弃去培养基,加入 PBS 洗涤2 次,每次 5 分钟。
b.固定:加入固定液 4'℃ 固定 30 分钟。
c.洗涤:加入 PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
d.通透:加入通透液室温孵育 5分钟。
e.洗涤:加入 PBS 洗涤 2 次,每次5 分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
1.2 悬浮细胞:
a.洗涤:离心收集细胞(不超过 2x106 个细胞),加入 PBS 洗涤2次,每次 5分钟。
b.固定:加入固定液 4°℃ 固定 30 分钟。
注:建议置于摇床上固定,以防止细胞聚团。
c.洗涤:加入 PBS 洗涤2次,每次5分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
d.通透:加入通透液室温孵育 5 分钟。
e.洗涤:加入 PBS 洗涤2次,每次5分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
1.3 石蜡切片:
a.脱蜡:室温下将石蜡切片置于二甲苯中脱蜡 5-10 分钟,重复两次。
b.水化:用无水乙醇浸泡 5 分钟,重复两次。随后用梯度乙醇(90%、80%、70%)依次浸泡2分钟。
c.洗涤:加入 PBS 洗涤2次,每次5分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
d.通透:加入适量蛋白酶 K 溶液,室温孵育 15-30 分钟。
注:需自行优化蛋白酶K溶液孵育的温度和时间。
e.洗涤:加入 PBS 洗涤2 次,每次5分钟,除尽蛋白酶 K,并用滤纸吸去多余的液体。
1.4 冰冻切片
a.固定:将冰冻切片回温至室温。加入固定液 4°℃ 固定 30-60 分钟。
b.洗涤:加入 PBS 洗涤2 次,每次 10 分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
c.通透:加入通透液室温孵育5分钟。
d.洗涤:加入 PBS 洗涤 2 次,每次 10 分钟。轻轻弃去 PBS,并用滤纸吸去多余的液体。
注:所有处理好的样本建议置于湿盒中保持湿润,切勿让样品干燥。
配制 TUNEL 工作液
标记与检测
对于贴壁细胞或组织切片:
加入 50 μL TUNEL 工作液,37°℃ 避光孵育 60 分钟。加入 PBS 洗涤3次。加入抗荧光淬灭封片液(HY-K1042)封片后在荧光显微镜下观察荧光效果。
注:a.注意避免 TUNEL 工作液的蒸发。
b.对于6孔板的每个孔,宜加入 100 μL TUNEL 工作液。
c.若 TUNEL 反应过强,可用 TdT Dilution Buffer 将 TdT Enzyme 稀释
2-5 倍后再进行操作。
对于悬浮细胞:
加入 50 μL TUNEL 工作液,37°℃ 避光孵育 60 分钟。加入 PBS 洗涤3次。加入 250-500 μL PBS 充分悬浮细胞,用流式细胞仪检测或涂片后在荧光显微镜下观察荧光效果。
注:若 TUNEL 反应过强,可用 TdT Dilution Buffer 将 TdT Enzyme 稀释2-5 倍后再进行操作。
