Hydroxyphenyl Fluorescein羟苯基荧光素HPF

　　羟苯基荧光素Hydroxyphenyl Fluorescein (HPF) 是一种稳定的 ROS 荧光探针染料，比 H2DCFDA  的特异性与稳定性强。羟苯基荧光素Hydroxyphenyl Fluorescein 通过羟基自由基，与细胞内过氧亚硝基反应，可产生强烈的绿色荧光。Hydroxyphenyl Fluorescein 羟苯基荧光素可应用于荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标仪或流式细胞仪。其荧光波长：Ex/Em=490/515 nm。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　HPF 工作液的配制

 

　　1.1 制备储存液

 

　　用 DMSO 配制 10 mM 的 HPF。

 

　　注：HPF 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。

 

　　1.2 工作液的配制

 

　　用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-10 μM 的 HPF 工作液。

 

　　注：请根据实际情况调整 HPF 工作液浓度，且现用现配。

 

　　细胞染色

 

　　2.1 准备工作

 

　　悬浮细胞：离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。

 

　　贴壁细胞：弃去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。

 

　　2.2 加入 1 mL HPF 工作液，室温孵育 15 分钟。

 

　　2.3 400 g，4℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。

 

　　2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。

 

　　2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。

 

　　体内研究

 

　　Hydroxyphenyl Fluorescein羟基苯基荧光素（HPF）探针（15 μl，25 μM）在麻醉的小鼠中进行睾丸内注射，时间是在离子辐射（IR）前20分钟。通过氧化形式的HPF发出的荧光信号来评估OH的积累

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。这些方法仅供参考。