中文名乙莫克舍Etomoxir抑制CPT-1a表达吗

　　乙莫克舍Etomoxir ((R)-(+)-乙莫克舍Etomoxir) 是肉碱棕榈酰转移酶 1a (CPT-1a) 抑制剂，通过抑制 CPT-1a 可抑制脂肪酸氧化，并抑制人、大鼠和豚鼠中棕榈酸酯的氧化。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　乙莫克舍Etomoxir 不可逆地结合 CPT-1 的催化位点，抑制其活性，但也上调脂肪酸氧化酶。乙莫克舍Etomoxir 被开发为位于线粒体外膜上的线粒体肉碱棕榈酰转移酶-1 (CPT-1) 的抑制剂。乙莫克舍Etomoxir，在肝脏中可以作为过氧化物酶体增殖剂，增加 DNA 合成和肝脏生长。因此，除了作为 CPT1 抑制剂之外，依托莫克还可被视为 PPARalpha 激动剂[1]。乙莫克舍Etomoxir 是环氧乙烷羧酸肉碱棕榈酰转移酶 I 抑制剂的成员，已被建议作为针对心力衰竭的抑制剂。急性 乙莫克舍Etomoxir 处理不可逆地抑制肉碱棕榈酰转移酶 I 的活性。结果，脂肪酸输入线粒体和 β-氧化减少，而胞质脂肪酸积累和葡萄糖氧化升高。与 乙莫克舍Etomoxir 长时间孵育 (24 小时) 对几种代谢酶的表达产生不同的影响[2]。

 

　　体内研究

 

　　乙莫克舍Etomoxir 是游离脂肪酸 (FFA) 氧化相关关键酶 CPT1 的抑制剂。P53 直接与 Bax 相互作用，Bax 被 乙莫克舍Etomoxir 抑制，进一步证实了 P53 和 Bax 的直接相互作用，以及 db/db 小鼠中 FAO 介导的线粒体 ROS 生成的参与[3]。大鼠每天注射 乙莫克舍Etomoxir，一种特定的 CPT-I 抑制剂，持续 8 天，剂量为 20 mg/kg 体重。乙莫克舍Etomoxir 处理的大鼠显示心脏 CPT-I 活性降低 44%。用 20 mg/kg 乙莫克舍Etomoxir 处理 Lewis 大鼠 8 天不会改变血糖水平，这与类似的 乙莫克舍Etomoxir 喂养研究一致。同样，乙莫克舍Etomoxir 喂养不会影响体重增加等一般生长特征，也不会影响后肢肌肉质量。然而，在 乙莫克舍Etomoxir 处理的大鼠中，心脏质量和肝脏质量均显著增加了 11%[4]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞实验[2]

 

　　大鼠心肌成肌细胞H9c2在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养至近融合状态。部分实验中，细胞先在无血清DMEM中预孵育2小时（含或不含1–80 μM依拖莫西尔），随后加入0.1 mM [1-¹⁴C]油酸（10 μCi/皿，与BSA按1:1摩尔比结合）再孵育2小时。另一些实验中，细胞先预孵育2小时（含或不含40 μM依拖莫西尔），随后加入以下同位素标记底物之一孵育2小时：0.1 μM 或 0.1 mM [1,3-³H]甘油（10 μCi/皿）、0.1 mM [1-¹⁴C]油酸（2 μCi/皿，1:1结合BSA）、0.1 mM [1-¹⁴C]棕榈酸（2 μCi/皿，1:1结合BSA）、28 μM [甲基-³H]胆碱（2 μCi/皿）、0.4 mM [³H]丝氨酸（20 μCi/皿）或40 μM 肌醇-[³H]（10 μCi/皿）。孵育结束后弃去培养基，用冰冷生理盐水洗涤细胞两次，再以2 mL甲醇–水（v/v, 1:1）裂解并收集细胞用于脂质提取。取部分匀浆液测定细胞对放射性物质的总摄取量；随后分离磷脂组分，并检测其放射性强度。

 

　　MCE未独立验证上述方法的准确性，仅供参考。

 

　　动物给药[3][4]

 

　　小鼠实验 [3]

 

　　本研究共使用80只雄性C57BLKS/J leprdb/db（db/db）糖尿病小鼠及20只同窝野生型（WT）对照小鼠（8周龄）。db/db小鼠随机分为四组：db/db对照组、依拖莫西尔组、MitoQ组和PFT-α组。

 

　　依拖莫西尔组：腹腔注射依拖莫西尔（1 mg/kg），每周两次；

 

　　MitoQ组：饮水中添加50 μM MitoQ（水瓶用锡箔纸包裹避光，每3天更换一次）；

 

　　PFT-α组：腹腔注射PFT-α（1 mg/kg），每周两次；

 

　　WT小鼠给予相应溶剂对照。

 

　　实验周期为8周。末期采集外周血及骨髓细胞用于后续分析。

 

　　大鼠实验 [4]

 

　　选用体重150–200 g的雄性Lewis大鼠。动物饲养于12 h:12 h明暗循环环境中，自由摄食标准Purina饲料及饮水。大鼠随机分为两组：（1）对照组；（2）依拖莫西尔组。依拖莫西尔以20 mg/kg体重剂量溶于0.9%（w/v）NaCl溶液，腹腔注射，连续给药8天；对照组给予等体积生理盐水。末次给药于实验前24小时完成。

 

　　MCE未独立验证上述方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Rupp H, et al. The use of partial fatty acid oxidation inhibitors for metabolic therapy of angina pectoris and heart failure. Herz. 2002 Nov;27(7):621-36.

 

　　[2]. Xu FY, et al. 乙莫克舍Etomoxir mediates differential metabolic channeling of fatty acid and glycerol precursors into cardiolipin in H9c2 cells. J Lipid Res. 2003 Feb;44(2):415-23.

 

　　[3]. Li J, et al. FFA-ROS-P53-mediated mitochondrial apoptosis contributes to reduction of osteoblastogenesis and bone mass in type 2 diabetes mellitus. Sci Rep. 2015 Jul 31;5:12724.

 

　　[4]. Luiken JJ, et al. 乙莫克舍Etomoxir-induced partial carnitine palmitoyltransferase-I (CPT-I) inhibition in vivo does not alter cardiac long-chain fatty acid uptake and oxidation rates. Biochem J. 2009 Apr 15;419(2):447-55.