Puromycin嘌呤霉素

　　嘌呤霉素Puromycin 是从细菌链霉菌中分离的氨基糖苷类抗生素。 它是一种蛋白质合成抑制剂。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Puromycin嘌呤霉素在氨酰-sRNA形成后阻断蛋白质合成，同时导致小肽段积累。这两种效应似乎都是由于核糖体结合的肽酰-sRNA发生断裂所致，从而释放出不完整的肽链[1]。Puromycin嘌呤霉素是氨酰-tRNA 3'末端的类似物，它能通过非特异性连接到生长中的 polypeptide 链上，导致翻译的提前终止。Puromycin嘌呤霉素具有两种抑制作用模式：第一种是作为受体底物，攻击P位的肽酰-tRNA，形成附带嘌呤霉素的新生肽链并导致其释放；第二种是与氨酰-tRNA竞争结合A'位点[2]。当使用微量时，新合成蛋白质中嘌呤霉素的掺入量直接反映了体外mRNA的翻译速率。嘌呤霉素免疫检测法是放射性氨基酸标记法的一种优势替代方案。它允许通过免疫荧光显微技术直接评估单细胞的翻译活性，并通过流式细胞术评估异质性细胞群体的翻译活性[3]。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Nathans D, et al. Puromycin inhibition of protein synthesis: incorporation of puromycin intopeptide chains. Proc Natl Acad Sci U S A. 1964 Apr;51:585-92.

 

　　[2]. Miyamoto-Sato E, et al. Specific bonding of puromycin to full-length protein at the C-terminus. Nucleic Acids Res. 2000 Mar 1;28(5):1176-82.

 

　　[3]. Schmidt EK, et al. SUnSET, a nonradioactive method to monitor protein synthesis. Nat Methods. 2009 Apr;6(4):275-7.