Proteinase K是一种非特异性丝氨酸蛋白酶
2025-06-18 
MCE
Proteinase K (Protease K) 是可用于蛋白消化的一种非特异性丝氨酸蛋白酶。Proteinase K 在有 SDS 或尿素存在的情况下，在很大 pH 值 (4-12)、盐浓度和温度单位内均有活性。Proteinase K 可用于改进提取和检测病毒核酸的方法。
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CAS No. : 39450-01-6
别名：蛋白酶K; Protease K
体外研究：
Proteinase K 激酶可用于断裂 MTX 与 BSA 之间的酰胺键以及 BSA 结构中的酰胺键[2]。
指南（以下是我们推荐的协议。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改）。
Proteinase K 具有优越的蛋白质降解特性，可用于直接从接种的病毒运输培养基 (VTM) 中检测 SARS-COV2 病毒成分，无需提取 RNA[3]。
SARS-CoV2 rRTPCR 检测方案[3]:
1.将每份 SARS-COV2 样本的 VTM 分离到三个 EP 管中 (每管 45 μL)；
2.加入 2.5 μL (20 mg/mL 浓缩液) Proteinase K (PK)，使 PK 的终浓度为 ~1 mg/ml VTM；
3.25°C 孵育 5 分钟；
4.60°C 孵育 15 分钟；
5.98°C 孵育 10 分钟，4°C 保存样品；
6.取 5 μL 提取的 RNA 作为模板，进行 rRTPCR 检测；
7.用 BIORAD CFX96 实时荧光定量 PCR 仪进行 rRTPCR 检测，以阈值循环数 (Ct) 值小于 40 为阳性标准。
Proteinase K 可提高痰液样本的均质效果和阳性率，提高提取的核酸浓度[4]。
甲型流感病毒 (IAV) 核酸提取方案[4]:
1.将标本分装至三个 EP 管中 (每管 500 μL)；
2.加入 500 μL 0.4 mg/mL Proteinase K 缓冲液，涡旋 20 秒；
3.55°C孵育 25 分钟，每 5 分钟涡旋 5 秒;
4.采用全自动核酸提取系统 (上海之江生物技术有限公司) 通过磁珠法提取 RNA，取 200 μL 样本；
5.评估纯 RNA 产品的 A260/A280 比率，标准范围为 1.8 至 2.0。
细胞实验：
H2O 中的溶解度 : 25 mg/mL (超声助溶)
参考文献：
[1]. W Ebeling, et al. Proteinase K From Tritirachium Album Limber. Eur J Biochem . 1974 Aug 15;47(1):91-7.
[2]. Nosrati H, et al. Multifunctional nanoparticles from albumin for stimuli-responsive efficient dual drug delivery. Bioorg Chem. 2019 Jul;88:102959.
[3]. Shukla A, et al. Vitality of Proteinase K in rRTPCR Detection of SARS-CoV2 Bypassing RNA Extraction. Front Cell Infect Microbiol. 2021 Nov 3;11:717068.
[4]. Yu F, et al. Comparative Evaluation of Three Preprocessing Methods for Extraction and Detection of Influenza A Virus Nucleic Acids from Sputum. Front Med (Lausanne). 2018 Mar 2;5:56.
