Cycloheximide放线菌酮是一种蛋白合成抑制剂
2025-06-11 
MCE
Cycloheximide (Naramycin A) 是一种抗真菌 (antifungal) 抗生素，发现于 Streptomyces griseus，是真核生物蛋白质合成 (protein synthesis) 的抑制剂，抑制体内蛋白质合成和 RNA 合成的 IC50 值分别为 532.5 nM 和 2880 nM。Cycloheximide 与真核细胞蛋白质合成过程中核糖体 60S 亚基的 E- 位点结合，阻断 eEF2 介导的核糖体易位过程并阻止新蛋白质的合成。Cycloheximide 可抑制铁死亡 (ferroptosis) 并抑制自噬 (autophagy)。
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体外研究：
Cycloheximide (200µM，2 或 10 分钟) 在体外抑制 eEF2 介导的 tRNA 易位[1]。
Cycloheximide (35 μM，1 或 4 小时) 抑制兔主动脉平滑肌细胞和 J774A.1 巨噬细胞新生蛋白合成[4]。
Cycloheximide (0.5-1 μg/mL，1-3 天) 抑制 C6 胶质瘤细胞增殖，诱导细胞周期阻滞在 G1 期和 S 期，促进 C6 胶质瘤细胞分化[5]。
注意事项:
1. 传代次数、细胞状态、细胞密度都可能会影响实验效果。需要调整细胞状态至较好时开展实验 (HCT 116 贴壁细胞形态较小，密度大时容易聚团，铺细胞尽量均匀)；
2. 不同细胞系对 Cycloheximide 敏感度不同，检测指标可能有差异，建议参考文献，提前做预实验 (摸索药物处理时间、浓度，抗体条件)，确定实验方案合理可行；
3. 药物现配现用，可超声加热助溶，直至溶液澄清透明; 首次实验用不完时需分装冻存 -20℃；
4. 检测指标 MDM2、c-Myc 蛋白出现双条带，可能是发生了翻译后修饰；
a. c-Myc存在多种翻译后修饰 (c-Myc 多个位点存在磷酸化修饰、乙酰化修饰、泛素化修饰、糖基化修饰)，常出现实际检测分子量与预测条带大小不符，或者两条条带现象[6]。
b. MDM 2 存在多个磷酸化位点，预测分子量为 55 kDa，但由于存在多种异构体和翻译后修饰，以及 p53 激活时对 MDM2 有剪切作用，实测分子量大小为 90 kDa，60 kDa，可能观察到多个条带[7]。
体内研究：
Cycloheximide (30、60 或 120 mg/kg, 在用 200 μA 电击训练之前注射）对小鼠记忆测试试验的潜伏期有显著影响 (P<0.001)。在盐水对照中，这种电击水平导致测试试验的延迟明显高于训练中的延迟。Cycloheximide (30 mg/kg，注射) 导致测试试验的潜伏期明显高于盐水对照组。接受较高剂量注射 Cycloheximide 的小鼠在测试试验中的潜伏期与盐水组相当，即在这些条件下较高剂量既不增强也不损害记忆，导致倒 U 型剂量反应曲线用于 Cycloheximide 增强记忆[2]。
Cycloheximide (200 mg/kg, 腹腔注射，KA 给药前 20 分钟) 在 Kainic acid (KA) (HY-N2309) 诱导的小鼠海马原代神经元中抑制细胞外信号调节蛋白激酶 (p-ERK)、c-Jun N-末端激酶 1 (p-JNK1) 和钙/钙调素依赖性蛋白激酶 II (p-CaMK II) 的磷酸化，以及 c-Fos 和 c-Jun 蛋白表达增加[8]。
参考文献：
[1]. Schneider-Poetsch T, et al. Inhibition of eukaryotic translation elongation by cycloheximide and lactimidomycin. Nat Chem Biol. 2010 Mar;6(3):209-217.
[2]. Gold PE, et al. Cycloheximide impairs and enhances memory depending on dose and footshock intensity. Behav Brain Res. 2012 Aug 1;233(2):293-7.
[3]. Park W S, et al. Therapeutic window for cycloheximide treatment after hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rats. J Korean Med Sci. 2006 Jun;21(3):490-4.
[4]. Croons V, et al. Differential effect of the protein synthesis inhibitors puromycin and cycloheximide on vascular smooth muscle cell viability. J Pharmacol Exp Ther. 2008 Jun;325(3):824-32.
[5]. Liu X, et al. Induction of cell cycle arrest at G1 and S phases and cAMP-dependent differentiation in C6 glioma by low concentration of cycloheximide. BMC Cancer. 2010 Dec 15;10:684.
[6]. Maheswaran S, et al. Intracellular association of the protein product of the c-myc oncogene with the TATA-binding protein. Mol Cell Biol. 1994 Feb;14(2):1147-52.
[7]. Pochampally R, et al. Activation of an MDM2-specific caspase by p53 in the absence of apoptosis. J Biol Chem. 1999 May 21;274(21):15271-7.
[8]. Lee HK, et al. Cycloheximide inhibits neurotoxic responses induced by kainic acid in mice. Brain Res Bull. 2003 Jun 30;61(1):99-107.
