MLI-2是LRRK2抑制剂

    MLi-2是高效选择的，具有口服活性，可渗透大脑的LRRK2抑制剂。IC50值为0.76 nM。

 

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    MLi-2的生物活性

 

    体外

 

    MLi-2 在体外纯化的LRRK2激酶测定中表现出优异的效力（IC 50 = 0.76 nM），监测LRRK2 pSer935 LRRK2的去磷酸化的细胞测定（IC 50 = 1.4 nM），以及放射性配体竞争结合测定（IC 50 = 3.4）纳米）。除了多种受体和离子通道外，MLi-2对超过300种激酶的选择性超过295倍。

 

    体内

 

    如通过pSer935 LRRK2的去磷酸化所测量的，MLi-2小鼠中的急性口服和亚慢性剂量给药在24小时期间导致剂量依赖性中枢和外周靶标抑制。在脑和血浆暴露的15周时间内，用MLi-2治疗MitoPark小鼠具有良好的耐受性。在MLi-2处理的MitoPark小鼠中观察到肺的形态学变化，与II型肺细胞增大

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    通过在100％DMSO中将10mM MLi-2储备液稀释至顶部浓度98μM，然后在DMSO中1：2.15连续稀释9次来制备MLi-2剂量反应。通过Labcyte Echo将400纳升每种稀释液点样到384孔黑色侧板上，然后在1x测定缓冲液中点样10μL2.5nM酶溶液。在室温下孵育30分钟后，开始激酶反应，在1x测定缓冲液中加入10μL800nM荧光素标记的LRRKtide肽底物和186μMATP溶液。使反应在25℃下进行1小时。然后通过加入20μL含有4nM Tb标记的抗磷酸LRRKtide抗体和20mM EDTA的TR-FRET稀释缓冲液终止反应。在室温下温育1小时后，在340,520和495nm上读板.

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠：将MLi-2悬浮于30％Captisol中，并以10mL / kg的体积给药。剂量计算基于活性部分。小鼠接受MLi-2 [1-100 mg / kg; 口服（PO）]，或安乐死前1小时过量的二氧化碳。在安乐死之后，立即解剖小鼠大脑皮层并在干冰上在钢板上冷冻，以通过蛋白质印迹分析pSer935 LRRK2。收集血浆和脑样品并冷冻以通过LC-MS / MS测定MLi-2水平。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。