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MCC950是NLR抑制剂

    MCC950 (CP-456773; CRID3) 是一种有效,选择性的 NLRP3 抑制剂,在BMDMs 和 HMDMs中的IC50 分别为 7.5 nM 和 8.1 nM。
 
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    生物活性
 
    体外
 
    MCC950可以在纳摩尔浓度下阻断经典和非经典NLRP3激活。MCC950特别抑制NLRP3,但不抑制AIM2,NLRC4或NLRP1激活。在小鼠骨髓衍生的巨噬细胞(BMDM)和人单核细胞衍生的巨噬细胞(HMDM)中测试了MCC950对NLRP3炎性小体激活的影响。BMDM中MCC950 的IC 50约为7.5 nM,而HMDM中它具有相似的抑制能力(IC 50 = 8.1 nM)。MCC950还可以剂量依赖性地抑制IL-1β的分泌,但不能抑制TNF-α的分泌。MCC950在刺激非典型途径后特异性阻断caspase-11-定向的NLRP3激活和IL-1β的分泌。NLRC4刺激的IL-1β和TNF-α分泌(由鼠伤寒沙门氏菌激活)即使浓度为10 ?M,也不会被MCC950抑制。MCC950不会抑制鼠伤寒沙门氏菌引起的caspase-1激活或IL-1β加工。MCC950处理基本上不影响细胞裂解物中的前胱天蛋白酶-1和前IL-1β的表达。
 
    体内
 
    MCC950降低白细胞介素1p(IL-1β)的产生,并减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的严重程度,EAE是多发性硬化症的疾病模型。使用MCC950进行预处理可降低血清中IL-1β和IL-6的浓度,但不会显着降低TNF-α的含量。用MCC950治疗小鼠可延迟发作并降低EAE的严重程度。与在PBS处理的小鼠相比,在第22天处死的小鼠的脑单核细胞的细胞内细胞因子染色和FACS分析显示,在MCC950处理的小鼠中,IL-17和产生IFN-γ的CD3 + T细胞的频率适度降低。CD3 +的CD4 +和γδ +亚群中的IFN-γ尤其是产生IL-17的细胞数量也减少了T细胞
 
    实验参考方法
 
    细胞分析
 
    BMDM在5×10接种5 / mL或1×10 6 5×10 /毫升,HMDM 5 / mL和PBMC以2×10 6 / mL或5×10 6 / mL,在96个孔板中。第二天,更换过夜培养基,并用来自大肠杆菌的 10 ng / mL LPS刺激细胞血清型EH100(ra)TLRgrad 3小时。除去培养基,并用含有DMSO(1:1,000),MCC950(0.001-10 ?M),格列本脲(200 ?M),小白菊酯(10 ?M)或拜耳半胱氨酸白三烯受体拮抗剂1-(5-)的无血清培养基(SFM)代替。羧基-2 {3- [3- [4-(3-环己基丙氧基)苯基]丙氧基}苯甲酰基)哌啶-4-羧酸(40 ?M),持续30分钟。然后用炎性体激活剂刺激细胞:5 mM腺苷5'-三磷酸二钠二水合物(ATP)(1 h),1 ?g / mL聚(脱氧腺苷-胸苷)酸性钠盐(Poly dA:dT)转染Lipofectamine 200( 3-4小时),200 ?g / mL MSU(过夜)和10 ?M尼日利亚霉素(1小时)或鼠伤寒沙门氏菌UK-1株。还用25 ?g / mL聚腺苷酸-多尿苷酸刺激细胞(4小时)。对于非典型的炎性体激活细胞,用100 ng / mL Pam3CSK4灌注细胞4 h,除去培养基并用含DMSO或MCC950的SFM代替,并用0.25%FuGENE转染2μg/ mL LPS 16 h。去除上清液,并使用ELISA试剂盒进行分析。使用CytoTox96非放射性细胞毒性测定法测量LDH释放。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    小鼠
 
    将 C150BL / 6小鼠皮下免疫150 ?g在含有4 mg / mL(0.4.mg/小鼠)热灭活的MTB的CFA中乳化的MOG肽35-55。在第0天和第2天腹腔内给小鼠注射500 ng百日咳毒素(PT:kaketsuken)。在疾病诱发的第0天,1天和2天以及之后每2天对小鼠腹腔注射MCC950(10 mg / kg)。在相同时间点向对照小鼠施用媒介物(PBS)。每天观察小鼠的疾病临床体征(无盲)。疾病严重度评分如下:无临床体征,0;tail尾,1;共济失调的步态,2; 后肢无力3 后肢瘫痪,4;和四瘫5。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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