DAPT是γ-secretase抑制剂
2019-10-31 
MCE小分子
DAPT是 γ-分泌酶 (γ-secretase) 抑制剂，抑制总 Aβ 和 Aβ42 的 IC50 分别为 115 和 200 nM。
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生物活性
体外
DAPT抑制Aβ产生超过90％，仅影响培养基中APPβ的适度降低。尽管通过DAPT处理可将APPβ降低约30％，但这种作用不是浓度依赖性的，并且通过除去DAPT可以逆转。用递增浓度的DAPT（0、25、50和75μM）处理CNE-2细胞，并且在48小时后以剂量依赖的方式减少γ分泌酶生成的Notch 1片段Val1744-NICD（P <0.01 ）。在浓度为50μM的DAPT中，γ-分泌酶的活化几乎完全被抑制。
体内
将DAPT给予PDAPP小鼠（100 mg / kg sc），并在大脑皮层中检查DAPT和Aβ的水平。在治疗后3小时，大脑中的DAPT峰值达到490 ng / g，并且在最初的18小时中，持续维持高于100 ng / g（?200 nM）的水平。这些DAPT的大脑浓度超过了其IC 50，可降低神经元培养物中的Aβ（115 nM），并具有强大的药效并维持药效。DAPT通过下调大鼠Notch 1和核因子kappa B的表达来保护大脑免受脑缺血的影响。Western blot分析也显示DAPT组（0.03 mg / kg）中Notch 1和NF-κB表达显着降低（P <0.05 vs. MCAO组）。
实验参考方法
细胞分析
转染APP 751基因的人类胚胎肾细胞（HEK 293）用于常规Aβ还原测定。细胞接种在96孔板中，并使其在Dulbecco氏补充有10％热灭活的胎牛血清改良的Eagle培养基（DMEM）贴壁过夜。细胞进行预处理2小时，在37℃下用DAPT（0，0.4％，2，10，50和250纳米），媒体被吸出并施加新鲜化合物的解决方案。再经过2小时的处理后，取出条件培养基，并通过对总Aβ特异的夹心ELISA（266-3D6）进行分析。相对于用0.1％DMSO处理的对照细胞测量Aβ产生的减少，并表示为抑制百分比。使用XLfit软件将来自至少六次剂量的数据一式两份拟合到四参数逻辑模型中，以确定效力。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
过表达APP V717F的三至四个月大的杂合PDAPP转基因小鼠淀粉样前体蛋白的突变体形式。每个治疗组（n = 10）由年龄匹配的雄性和雌性动物的相等数目被禁食过夜之前的治疗。治疗组和对照组均以10 mL / kg的剂量分别使用DAPT或溶媒给药。处理组织并进行所有Aβ和APP测量。移除脑部后，从一个半球皮质匀化，用5M胍萃取，50毫摩尔Tris-pH 8.0中，离心分离，将上清液用于Aβ测量。将另一半球的皮层速冻以分析化合物水平。Aβ水平以湿组织重量的ng / g表示，相对于媒介物处理过的对照动物的平均Aβ水平，计算百分比降低。
大鼠
使用雄性Sprague-Dawley大鼠（260-290g）。MCAO后立即将DAPT溶液立体定向注入脑侧脑室（LV）。立体定向注射到的LV进行在坐标-0.8毫米正位，±1.5毫米和中侧-4.5毫米从囟背腹。30只大鼠随机分配到三个操作组（每组10只中）：假手术组，其接收PBS等体积的无MCAO操作; MCAO组在MCAO后接受等体积的PBS（MCAO）；和接收DAPT作为MCAO后0.03毫克/千克DAPT组。24个小时操作后的第一神经功能进行评估，然后操作之后48小时的第二神经功能进行评估。同时，脑含水量和梗塞体积进行测量和不同组之间进行比较。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
