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Cycloheximide

  Cycloheximide (Naramycin A) 是真核生物蛋白质合成的抑制剂,抑制体内蛋白质合成和RNA合成的 IC50 值分别为532.5 nM 和 2880 nM。

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  Cycloheximide的生物活性

  体外

  环己酰亚胺(CHX)是用于抑制蛋白质合成的最常用的实验室试剂。 已显示环己酰亚胺阻断真核翻译的延伸期。 环己酰亚胺结合核糖体并抑制eEF2介导的易位。令人惊讶的是,环己酰亚胺允许在停止任何进一步延伸之前进行一个完整的易位循环。 推测环己酰亚胺环己酰亚胺需要E位点结合的脱酰基tRNA用于活性[1]。

  体内

  在用200μA休克训练之前,小鼠接受30,60或120mg / kg的环己酰亚胺注射。 环己酰亚胺对记忆试验试验的潜伏期有显着影响(P <0.001)。 在盐水对照组中,这种休克水平导致测试试验的潜伏期明显高于训练时的潜伏期。 所测试的最低剂量的环己酰亚胺(30mg / kg)的注射导致试验试验的潜伏期显着高于盐水对照组中观察到的潜伏期。 接受两种较高剂量的环己酰亚胺中的任一种的小鼠在试验试验中具有与盐水组相当的潜伏期,即,在这些条件下较高剂量既不增强也不损害记忆,导致倒U型剂量 - 反应曲线。 用于环己酰亚胺增强记忆[2]。 通过氯化三苯基氯化物(TTC)的梗塞面积的形态测量分析测量的梗塞体积分别在HI后0或6小时给予环己酰亚胺时显着降低92%和61%,但如果环己酰亚胺显示梗塞减少的显着趋势 与HI对照组相比,缺氧缺血(HI)后12小时给药,当给药延迟至HI后24小时时没有观察到保护作用

  cycloheximide的实验参考方法

  细胞分析

  为了测试细胞增殖,将每孔3000-5000个细胞(HeLa,HTB1和HEK 293T细胞; Jurkat,BT 474,HCC 1395,HCC 1937,HCC 2218和MDA MB231细胞; MCF 10A)接种在96孔板中并且 允许坚持过夜。 然后加入以指定浓度(0.1nM-1000μM)溶解在DMSO中的环己酰亚胺,将细胞再温育24小时。 以每孔1μCi加入[3H] - 胸苷,并继续孵育另外7小时。 用PBS洗涤细胞两次,然后用胰蛋白酶消化,然后用Tomtec收集器收集细胞并结合GF / C过滤垫。 然后通过闪烁计数测量胸苷摄取[1]。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  cycloheximide的Animal Administration

  小鼠

  在该实验中使用雄性ICR小鼠(约2个月大)。 环己酰亚胺以0(盐水对照),30,60或120mg / kg的浓度IP施用。 在训练前30分钟施用环己酰亚胺注射。 120mg / kg剂量通常用于研究小鼠的健忘症。 注意,在大鼠(1-3mg / kg)中遗忘的环己酰亚胺剂量比在小鼠中低得多,这与大鼠和小鼠的LD50s的类似差异一致。 注射后30-60分钟测量的环己酰亚胺剂量为120-150mg / kg导致脑蛋白质合成的约95%抑制; 30mg / kg的剂量产生约80%的脑蛋白质合成抑制。

  大鼠

  在甲氧氟烷麻醉下,在7日龄Sprague Dawley大鼠幼仔中进行单侧颈动脉结扎。 颈部在中线切开,右颈总动脉用4-0丝永久结扎。 每只动物的手术总时间从未超过5分钟。 手术后,将大鼠返回母亲进行恢复并喂食2小时。 然后将幼崽置于100分钟的缺氧期(8%O2,92%N2)中,将它们置于部分浸没在温控水浴中的气密室中,以使室内的环境温度保持恒定36°。 C。 在HI与环己酰亚胺治疗组中,大鼠幼仔在恢复0,6,12或24小时时以0.6mg / kg的剂量腹膜内注射环己酰亚胺,并向HI对照给予等体积的生理盐水。 组。 然后,将大鼠幼崽送回大坝直至牺牲; 在HI后48和72小时分别在深度戊巴比妥麻醉(60mg / kg,腹膜内)下进行流式细胞术和氯化三苯基四氮唑(TTC)获得全脑组织。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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