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Ganetespib热休克蛋白抑制剂

    Ganetespib是一种热休克蛋白90 (HSP90) 抑制剂,在多种血液和实体肿瘤细胞系中表现出有效的细胞毒性

    MCE-Ganetespib的生物活性

    体外

    Ganetespib在基因组定义的NSCLC细胞系中导致受体酪氨酸激酶的消耗,下游信号传导的熄灭,增殖的抑制和细胞凋亡的诱导,IC50值范围为2-30nM。 Ganetespib在同基因Ba / F3 pro-B细胞中的效力也大约高20倍,通过表达EGFR和ERBB2突变体使IL-3独立。Ganetespib在一系列固体和血液肿瘤细胞系中表现出有效的体外细胞毒性,诱导已知Hsp90客户蛋白的降解,显示出对安莎霉素抑制剂17-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)的优越效力。Ganetespib是一种有效的HSP90抑制剂,并且在体外可以杀死犬肿瘤细胞系。Ganetespib在HEL92.1.7细胞中的效力或反应持续时间方面对P6和17-AAG具有优异的JAK / STAT抑制活性。

    体内

    Ganetespib(125mg / kg,i.v。)相对于正常组织在肿瘤中累积,并且显示出比17-AAG更高的体内功效,而没有增加毒性并且抑制增殖并诱导细胞凋亡,与NCI-H1975异种移植物中的EGFR消耗平行。 Ganetespib(100,125,150 mg / kg,i.v。)在致癌基因成瘾的固体和血液异种移植模型中显示出有效的抗肿瘤效力,这可通过显着的生长抑制和/或消退来证明

    Ganetespib的实验参考方法

    激酶测定

    在裂解缓冲液(20mM HEPES,pH 7.4,1mM EDTA,5mM MgCl 2,100mM KCl)中处理指数生长的细胞,并与浓度增加的17-AAG或ganetespib在4℃温育30分钟,并与之一起孵育。生物素-GM与Dynabeads MyOne链霉抗生物素蛋白T1磁珠在4℃下连接1小时。将珠子在裂解缓冲液中洗涤三次,并在95℃下在SDS-PAGE样品缓冲液中加热5分钟。将样品在4-12%Bis-Tris梯度凝胶上分离,并使用抗HSP90抗体进行蛋白质印迹。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    细胞分析

    基于根据经验确定每条线的最佳生长速率,使细胞在96孔板中生长。铺板后24小时,用指定的化合物或对照处理细胞72小时。向细胞中加入AlamarBlue(10%v / v),将板孵育3小时,然后进行荧光检测。对于比较活力/细胞凋亡测定,用递增浓度的ganetespib处理NCI-H1975细胞指定的时间段,并通过CellTiter Fluor进行活力分析,并通过Caspase Glo 3/7进行细胞凋亡。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    Animal Administration

    小鼠:如上培养NCI-H1975或HCC827细胞,并将0.5-1×107个细胞与50%RPMI 1640/50%基质胶混合,并皮下注射到SCID小鼠的侧腹中。对于功效研究,然后将具有100-200mm 3肿瘤的动物随机分成8个治疗组。肿瘤体积(V)通过等式V = 0.5236×L×W×T(长度,宽度和厚度)计算。通过以10mL / kg静脉推注尾静脉注射以10/18 DRD(10%DMSO,18%Cremophor RH 40,3.6%葡萄糖和68.4%水)配制的ganetespib处理动物。作为体内功效的测量,治疗和对照肿瘤的相对大小[(%T / C)值]由每个药物治疗组相对于媒介物治疗组或其自身的平均肿瘤体积的变化确定。在肿瘤消退的情况下。 每天监测体重。 对于生物标志物研究,携带NCI-H1975异种移植物的小鼠用单剂量载体或ganetespib或5个日剂量的载体或ganetespib以3或8组处理,并在不同时间点收获。切除肿瘤并在液氮中快速冷冻以制备蛋白质裂解物或固定在10%中性缓冲福尔马林中用于免疫组织化学。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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