CCCP

    CCCP是氧化磷酸化解偶联剂。

 

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    CCCP的生物活性

 

    体外

 

    CCCP抑制由各种类型的STING途径激活剂诱导的IFN-β产生。CCCP通过破坏STING和TBK1的结合来抑制STING，TBK1和IRF3的磷酸化。CCCP抑制STING及其下游信号分子TBK1和IRF3的激活，但不抑制STING易位至核周区域。CCCP损害STING和TBK1之间的相互作用，同时引发线粒体分裂。重要的是，关键线粒体裂变调节因子Drp1的敲除恢复了STING活性，表明CCCP通过DRP1介导的线粒体断裂下调STING途径。破坏膜电位的质子载体CCCP抑制DMXAA触发的STING信号传导途径。CCCP彻底抑制DMXAA处理的RAW264.7细胞和MEF中IFN-β的产生

 

    体内

 

    使用相同剂量的3mg / kg.bw各CCCP和PPEF。在两种情况下，在细菌负荷中观察到1个对数减少。然而，当PPEF的3毫克/ kg.bw组合使用用3mg / CCCP的kg.bw，6个对数10还原在细菌计数观察到。所开发的模型验证了联合治疗增强的抗菌活性。还测量了施用CCCP（4mg / kg腹膜内）或载体的SD大鼠心脏中的99m Tc-MIBI信号。在施用CCCP的大鼠心脏中99m Tc-MIBI信号降低，并且通过31 P磁共振波谱法测量的ATP含量同时降低。调查CCCP是否减少99m在大鼠中Tc-MIBI信号，我们分析了施用CCCP的大鼠切除的心脏组织的放射性同位素活性。在99m Tc-MIBI注射后180分钟，来自CCCP组心脏的99m Tc-MIBI信号显着低于载体组。

 

    溶剂和溶解度

 

    体内：

 

    请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案，配制前请先配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂 (为保证实验结果的可靠性，体内实验的工作也，建议您现用现配，当天使用；澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；以下溶剂前的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比)：

 

    1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》40％PEG300 》5％吐温-80 》45％生理盐水

 

    溶解度：≥2.5mg / mL（12.22 mM）; 明确解决方案

 

    *以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    稳定表达STING（1.5×10 5）的MEF（5×10 5），Raw264.7细胞（1×10 6）和HeLa细胞用DMXAA（100μg/ mL）刺激2或3小时，或用c-di-GMP（5μM），cGAMP（5μg/ mL）或聚（dA：dT）（2μg/ mL），持续6小时。CCCP（50μM）与DMXAA（100μg/ mL）共同处理，或在处理c-di-GMP或poly（dA：dT）的情况下处理最后5小时。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠

 

    雌性Balb / c小鼠n = 6，每个给药组20-25g，在4天和1天前腹膜内注射环磷酰胺150mg / kg.bw和100mg / kg.bw，使其中性粒细胞减少。对细菌感染。将0.1mL的10 6 ?CFU / mL细菌悬浮液注射到右后大腿肌肉中。感染后2小时，用PPEF（3 mg / kg.bw），CCCP（3 mg / kg.bw）和PPEF + CCCP（3 mg / kg.bw + 3 mg / kg.bw）联合治疗小鼠通过单次静脉推注溶解于0.1mL无菌水中。抗菌给药后二十四小时，人道地处死小鼠。无菌收集每只小鼠的右大腿肌肉，均质化并连续稀释并加工用于定量培养。

 

    大鼠

 

    将大鼠随机分成三组。在12.5MBq（337.8μCi）99m Tc-MIBI注射剂量（n = 6）后15分钟对一组实施安乐死。另外两组在相同剂量的99m Tc-MIBI注射后90分钟通过腹膜内（ip）注射施用4mg / kg CCCP（CCCP组; n = 7）或载体（媒介物组; n = 7）并实施安乐死再过90分钟后（99m Tc-MIBI注射后180分钟）。切下心脏并称重，用自动伽马计数器测量放射性在110和170keV之间。校正99m Tc-MIBI信号的物理衰减（半衰期= 6小时）

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。