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Maraviroc是选择性的CCR5拮抗剂

    Maraviroc是选择性的CCR5拮抗剂,具有抑制 HIV 的活性

    体外

    Maraviroc是一种选择性CCR5拮抗剂,具有强效的抗人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)活性。 Maraviroc抑制趋化因子诱导的细胞内钙重新分布的下游事件,针对MIP-1β,MIP-1α和RANTES获得的IC50为7至30nM。 当使用分离的多个(合并的)供体PBMC(IC90,3.1 nM)在5天抗病毒测定中测量时,Maraviroc在低纳摩尔浓度下对HIV-1 Ba-L(实验室适应的R5菌株)具有活性(IC90), 单供体PBMC(IC90,1.8 nM)或PM-1细胞(IC90,1.1 nM)。

    体内

    静脉注射后,大鼠和狗的清除值均为中等至高。 给药(分别为74和21mL / min / kg)。 Maraviroc在两个物种中的分布均适中(4.3至6.5升/ kg)。 maraviroc的半衰期值在大鼠中为0.9小时,在狗中为2.3小时。 口服给药(2mg / kg)后,Cmax(256ng / mL)发生1.5小时。 给药后,生物利用度为40%。 对于大鼠,口服给药后在门静脉中获得的浓度的研究表明,约30%的给药剂量是从肠道吸收的。 在DSS / TNBS结肠炎和转移模型中,Maraviroc通过选择性地减少携带CCR5的白细胞的募集来减轻肠道炎症的发展。

    实验参考方法

    激酶测定

    基本上使用稳定表达受体或其膜制剂的完整HEK-293细胞测量125 I标记的MIP-1α,MIP-1β和RANTES与CCR5的结合。 简而言之,将细胞重悬于结合缓冲液(含有1mM CaCl 2,5mM MgCl 2和0.5%牛血清白蛋白[BSA]的50mM HEPES并调节至pH 7.4)至2×10 6个细胞/ mL的密度。 对于膜制剂,将磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤的细胞重悬于裂解缓冲液(20mM HEPES,1mM CaCl 2,1片剂,每50mL,pH 7.4; Boehringer)中,然后在Polytron手持式均质器中均质化。 ,超速离心(40,000×g,30分钟),并在结合缓冲液中重新悬浮至蛋白质浓度为0.25mg / mL(在96孔板的每个孔中使用12.5μg膜蛋白)。 制备125 I-放射性标记的MIP-1α,MIP-1β和RANTES,并在测定中在结合缓冲液中稀释至终浓度为400pM。 向每个孔中加入适当的maraviroc稀释液至终体积为100μL,将测定板温育1小时,并通过预封闭和洗涤的Unifilter板过滤内容物,在过夜干燥后计数。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    细胞分析

    将HEK-293细胞等分试样(100μL,1×10 6个细胞/ mL)接种到聚-D-赖氨酸包被的板中,并在37℃下孵育过夜。 将可溶性重组人CD4(sCD4)(在培养基中稀释至4.5nM)和HIV-1 gp120的1:1混合物在室温下孵育15分钟,然后在稀释的存在下加入PBS洗涤的细胞中。 maraviroc能够确定IC50。 将测定板在37℃下孵育1小时并洗涤。 将Eu3 +标记的抗gp120抗体(在测定缓冲液中1/500稀释)加入每个孔(50μL)中并孵育1小时。 在加入增强溶液(200μL/孔)和测量Eu3 +荧光(Victor2多标记计数器;“铕”方案)之前,用洗涤缓冲液洗涤板三次。 非特异性结合作为在没有与sCD4预孵育的情况下与细胞一起孵育的gp120的荧光测量。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    动物实验

    老鼠和狗

    对雄性Sprague-Dawley大鼠进行单次静脉内和口服给药后,使用maraviroc进行临床前药代动力学研究(静脉内给予1 mg / kg体重[iv],口服给予10 mg / kg [po]; n = 2) 和雄性比格犬(0.5mg / kg静脉注射和2mg / kg po; n = 4)。 血浆样品在给药后长达24小时,并且使用特定的高效液相色谱 - 串联质谱分析测定未改变的马拉维罗的浓度。

    小鼠

    从6-10周龄的CCR5 - / - 小鼠或野生型对照小鼠(每组n = 8)收集脾细胞,并通过细胞分选分离幼稚CD4 + CD45RB高T细胞。 然后将总共3×105个CD45RB高细胞静脉内注射到Rag1 - / - 小鼠中,随后称重并每20天评估粪便评分以评估IBD发展。 为了研究Maraviroc是否从转移性结肠炎引起的肠道炎症中拯救,Rag1 - / - 小鼠注射CD4 + CD45RB - / - T细胞,34天后随机分入对照组(无需进一步治疗,n = 6)或治疗 用Maraviroc,50 mg / kg / d Maraviroc口服(n = 4)3周,每周5 d。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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